Human TNF-尾(Tumor Necrosis Factor Beta) ELISA Kit
- 价格
- 2600元
- 规格
- 96T
该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中TNF-β浓度
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人TNF-β抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人TNF-β会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人TNF-β抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人TNF-β抗体与结合在包被抗体上的人TNF-β结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，TNF-β浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中TNF-β的浓度。
反应类型 | 夹心法 |
规格 | 96T |
反应时间 | 3.5h |
反应性 | Human |
检测方法 | Colormetric |
检测范围 | 15.63—1000 pg/mL |
灵敏度 | 9.38 pg/mL |
样本体积 | 100μL |
样本类型 | 血清，血浆或其他生物体液 |
特异性
可检测样本中的人TNF-β，且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
重复性
板内，板间变异系数均<10%。
典型数据
由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
1000 | 2.405 | 2.408 | 2.329 |
500 | 1.67 | 1.698 | 1.619 |
250 | 0.931 | 0.918 | 0.839 |
125 | 0.531 | 0.533 | 0.454 |
62.5 | 0.268 | 0.255 | 0.176 |
31.25 | 0.19 | 0.18 | 0.101 |
15.63 | 0.124 | 0.131 | 0.052 |
0 | 0.077 | 0.079 | -- |
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean | 50.20 | 90.80 | 409.30 | 52.00 | 96.10 | 426.70 |
Standard | 2.50 | 3.80 | 13.90 | 3.10 | 4.80 | 21.30 |
C V (%) | 4.98 | 4.19 | 3.40 | 5.96 | 4.99 | 4.99 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
Serum (n=8) | 94-106 | 100 |
EDTA plasma (n=8) | 94-109 | 101 |
Cell culture media (n=8) | 85-100 | 92 |
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
1:2 | Range (%) | 94-106 | 99-112 | 90-105 |
Average (%) | 99 | 105 | 96 | |
1:4 | Range (%) | 96-107 | 83-97 | 94-112 |
Average (%) | 101 | 88 | 102 | |
1:8 | Range (%) | 98-112 | 83-94 | 90-105 |
Average (%) | 104 | 89 | 98 | |
1:16 | Range (%) | 97-113 | 84-97 | 93-109 |
Average (%) | 103 | 89 | 101 |
试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
中文名称 | 英文名称 | 规格 | 保存条件 |
ELISA酶标板(可拆卸) | Micro ELISA Plate(Dismountable) | 8 孔×12 条 | -20℃，可存放6个月 |
冻干标准品 | Reference Standard | 2 支 | |
浓缩生物素化抗体(100×) | Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支 120 μL | |
浓缩HRP酶结合物(100×) | Concentrated HRP Conjugate | 1支 120 μL | -20℃(避光)，可存放6个月 |
标准品&样品稀释液 | Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶 20 mL | 2-8℃.可存放6个月 |
生物素化抗体稀释液 | Biotinylated Detection Ab Diluent | 1瓶 14 mL | |
酶结合物稀释液 | HRP Conjugate Diluent | 1瓶 14 mL | |
浓缩洗涤液(25×) | Concentrated Wash Buffer (25×) | 1瓶 30 mL | |
底物溶液(TMB) | Substrate Reagent | 1瓶 10 mL | 2-8℃(避光) |
反应终止液 | Stop Solution | 1瓶 10 mL | 2-8℃ |
封板覆膜 | Plate Sealer | 5 张 | |
产品说明书 | Product Description | 1 份 | |
质检报告 | Certificate of Analysis | 1 份 |
说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
试验所需自备物品
· 1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
· 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
· 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
· 4. 吸水纸
操作步骤
| 1. 对应板孔中加入100μL标准品工作液或样本，37℃孵育90分钟 |
| 2. 弃掉板内液体后，立即加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟 |
| 3. 弃掉板内液体，洗板3次 |
| 4. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次 |
| 5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟左右 |
| 6. 每孔加入50μL终止液 |
| 7. 立即在450nm波长下读数，处理数据 |
客户发表文献
1. An optimized method for obtaining clinical-grade specific cell subpopulations from human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells
IF: 8.7550
Journal: CELL PROLIFERATION(2022)
DOI: 10.1111/cpr.13300
PMID: 35768999
样本类型: T cell
物种: Human
2. Aging affects responsiveness of peripheral blood mononuclear cells to immunosuppression of periodontal ligament stem cells:
IF: 1.287
Journal: JOURNAL OF INTERNATIONAL MEDICAL RESEARCH(2020)
DOI: 10.1177/0300060520930853
样本类型: Cell culture supernatant
物种: Human