HumanTNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit
- 价格
- 2400元
- 规格
- 96T
该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中TNF-α浓度
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人TNF-α抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人TNF-α会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人TNF-α抗体与结合在包被抗体上的人TNF-α结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，TNF-α浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中TNF-α的浓度。
反应类型 | 夹心法 |
规格 | 96T |
反应时间 | 3.5h |
反应性 | Human |
检测方法 | Colormetric |
检测范围 | 7.81—500 pg/mL |
灵敏度 | 4.69 pg/mL |
样本体积 | 100μL |
样本类型 | 血清，血浆或其他生物体液 |
特异性
可检测样本中的人TNF-α，且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
重复性
板内，板间变异系数均<10%。
典型数据
由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
500 | 2.427 | 2.436 | 2.376 |
250 | 1.562 | 1.573 | 1.513 |
125 | 0.993 | 0.986 | 0.926 |
62.5 | 0.477 | 0.496 | 0.436 |
31.25 | 0.245 | 0.241 | 0.181 |
15.63 | 0.166 | 0.163 | 0.103 |
7.81 | 0.105 | 0.113 | 0.053 |
0 | 0.059 | 0.06 | -- |
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean | 24.10 | 79.50 | 183.00 | 22.70 | 86.50 | 177.40 |
Standard | 1.50 | 3.80 | 9.70 | 1.20 | 4.00 | 7.60 |
C V (%) | 6.22 | 4.78 | 5.30 | 5.29 | 4.62 | 4.28 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
Serum (n=8) | 86-100 | 92 |
EDTA plasma (n=8) | 94-106 | 99 |
Cell culture media (n=8) | 93-107 | 99 |
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
1:2 | Range (%) | 92-105 | 84-97 | 88-99 |
Average (%) | 99 | 91 | 93 | |
1:4 | Range (%) | 99-116 | 87-99 | 91-104 |
Average (%) | 107 | 93 | 98 | |
1:8 | Range (%) | 97-113 | 81-93 | 92-109 |
Average (%) | 104 | 88 | 99 | |
1:16 | Range (%) | 96-112 | 85-98 | 95-107 |
Average (%) | 103 | 90 | 100 |
试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
中文名称 | 英文名称 | 规格 | 保存条件 |
ELISA酶标板(可拆卸) | Micro ELISA Plate(Dismountable) | 8 孔×12 条 | -20℃，可存放6个月 |
冻干标准品 | Reference Standard | 2 支 | |
浓缩生物素化抗体(100×) | Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支 120 μL | |
浓缩HRP酶结合物(100×) | Concentrated HRP Conjugate | 1支 120 μL | -20℃(避光)，可存放6个月 |
标准品&样品稀释液 | Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶 20 mL | 2-8℃.可存放6个月 |
生物素化抗体稀释液 | Biotinylated Detection Ab Diluent | 1瓶 14 mL | |
酶结合物稀释液 | HRP Conjugate Diluent | 1瓶 14 mL | |
浓缩洗涤液(25×) | Concentrated Wash Buffer (25×) | 1瓶 30 mL | |
底物溶液(TMB) | Substrate Reagent | 1瓶 10 mL | 2-8℃(避光) |
反应终止液 | Stop Solution | 1瓶 10 mL | 2-8℃ |
封板覆膜 | Plate Sealer | 5 张 | |
产品说明书 | Product Description | 1 份 | |
质检报告 | Certificate of Analysis | 1 份 |
说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
试验所需自备物品
· 1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
· 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
· 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
· 4. 吸水纸
操作步骤
| 1. 对应板孔中加入100μL标准品工作液或样本，37℃孵育90分钟 |
| 2. 弃掉板内液体后，立即加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟 |
| 3. 弃掉板内液体，洗板3次 |
| 4. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次 |
| 5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟左右 |
| 6. 每孔加入50μL终止液 |
| 7. 立即在450nm波长下读数，处理数据 |
客户发表文献
1. Targeting Mitochondria-Located circRNA SCAR Alleviates NASH via Reducing mROS Output
IF: 38.637
Journal: CELL(2020)
DOI: 10.1016/j.cell.2020.08.009
PMID: 33015716
样本类型: Cell culture medium
物种: Human
2. Increased Liver Localization of Lipopolysaccharides in Human and Experimental NAFLD
IF: 17.425
Journal: HEPATOLOGY(2020)
DOI: 10.1002/hep.31056
PMID: 31808577
样本类型: Serum
物种: Human